Standaardvoorbereiding:
Bereid een gemengde voorraadnorm door (±0.01 mg) ongeveer 10 mg van elke norm van de kavalactoneverwijzing in een volumetrische fles nauwkeurig te wegen 10-ml voor. Voeg 7,0 ml methanol toe en sonoriseer tot opgelost. Verdun aan volume met methanol en mengeling.
Bericht: Alternatief, bereid op gelijkaardige wijze voor een norm van de kavainvoorraad en gebruik de factoren van de kavalactonereactie te kwantificeren tegen.
Verdun de voorraadnorm om een minimum van een vier-punt standaardkromme te creëren. De voorgestelde standaardverdunningen van de voorraad zijn 1:10, 1:25, en 1:100 gebruikend methanol.
Bericht: Opslagnormen bij gekoelde temperaturen (0 - 5°C). Kavalactones degradeert snel na 48 uren. De voorbereiding van verse verwijzingsnormen vóór wordt elke analyse geadviseerd.
Apparaten
· Gekalibreerd analytisch saldo nauwkeurig aan ±0.01 mg
· De volumetrische fles, deelt A, geassorteerde grootte in
· Flesjes, chromatografie met GLB
· Het Systeem van de hoge Prestaties Vloeibare Chromatografie zoals die in USP-hoofdstuk wordt beschreven. Verifieer en documenteer dat de apparaten, de software, en de subsystemen prestatie-eisen voor Installatiekwalificatie/Verrichtingskwalificatie (IQ/OQ) ontmoeten.
· Filter, 0,45 µm, het nylon van Gelman Acrodisc (P/N 4426), het Polypropyleen van Whatman Puradisc™ (Kat. Nr 6788-2504), het Glas van Whatman GD/X (Kat. Nr 6894-2504) of gelijkwaardige Sonicator
· Kolom, YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 mm (Kat. Nr. BA99S05-2546WT). Gelijkwaardige kolom, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4,6 x 250 (Kat. Nr. JH08S04-2546WT).
Reagentia
· Water, HPLC rang of Nanopure
· Methanol, HPLC rang
· Acetonitrile, HPLC rang
· Fosforzuur, ACS-Reagensrang
Steekproefvoorbereiding:
Installatiemateriaal
Weeg (± 0.1mg) nauwkeurig ongeveer 750 mg fijn gemalen stam, schil, of wortelmateriaal.
Plaats het materiaal in een volumetrische fles 50-ml samen met 40 ml methanol/water (70/30). Sonoriseer 60 minuten bij kamertemperatuur.
Sta fles toe om aan kamertemperatuur te koelen en aan volume met methanol/water (70/30) en mengeling te verdunnen.
Filter en plaatssteekproef in een HPLC flesje en een GLB.
Poeder en Zacht Uittreksel (Deeg)
Weeg (± 0,1 mg) nauwkeurig ongeveer 100 mg van uittreksel in een volumetrische fles 50-ml. (Het 100 mg-gewicht is gebaseerd op een 50-60% kavalactoneinhoud in het uittreksel.) Bericht: Homogeniseer zorgvuldig uittreksel vóór bemonstering. Dit wordt door het uittreksel in een container verwezenlijkt te plaatsen in een 60° - het warme water van 80° wordt ondergedompeld C - bad dat tot vrij bewegend.
Voeg 40 ml methanol toe en sonoriseer 10 minuten of tot alle vaste lichamen hebben opgelost.
Sta fles toe om aan kamertemperatuur te koelen en aan volume met methanol en mengeling te verdunnen.
Filter en plaatssteekproef in een HPLC flesje en een GLB.
Poedersteekproeven
Het Kavauittreksel wordt vaak gemengd of nevel - droog op diverse dragers. Om poedersteekproeven met succes te analyseren, is het noodzakelijk om een stap van de steekproefvoorbereiding te ontwikkelen die kavalactones van de drager terugkrijgt. Dit kan worden verwezenlijkt door eerst met zuiver methanol of water te halen.
Chromatografische Voorwaarden:
Kolom: YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 mm
Kolomtemperatuur: 40°C
Stroomtarief: 0,6 mL/min voor YMCbasic; 1.0 mL/min voor J'Sphere
Mobiele Fase: isocratic 0,1% fosforzuur: isopropyl alcohol: acetonitrile (64:16: 20 v/v)
Opsporing: 220 NM (246 NM alternatief om selectiviteit te verbeteren)
Injectievolume: 5 µL
Uitvoeringstijd: 30 minuten
Procedure:
Bereid verwijzings standaardoplossingen en steekproefvoorbereidingen voor zoals geleid.
Maak één enkele injectie van een extractiemiddelspatie.
Maak enige injectie van de standaardvoorbereidingen.
Creeer een lineariteitperceel van standaard piekgebieden tegenover standaardconcentraties.
Maak enige injecties van steekproefvoorbereidingen.
Bereken de kavalactoneconcentratie in de steekproef.
Systeemgeschiktheid:
De correlatiecoëfficiënt van de lineaire regressie moet ≥0.999 zijn. De resolutie tussen desmethoxyyangonin en yangonin pieken moet ≥1.8 zijn.
Shaanxi y-Kruid Biotechnologieco., Ltd.